Третье празднование Владимирской иконы Божией Матери совершается 3 июня (21 мая по ст. ст.). В этот день вспоминают избавление Москвы от разгрома Махмет-Гиреем, ханом Казанским, который в 1521 году достиг пределов Москвы и стал жечь ее посады, но внезапно отступил от столицы, не причинив ей вреда.

Перед Владимирской иконой Божией Матери молились русские князья и цари, выступая в походы. При избрании московских митрополитов, а впоследствии патриархов, жребии избираемых клались в пелену этой иконы. Перед ней приносили присягу на верность своим государям знатнейшие люди Москвы.

В 1547 году в Московском Кремле был сильный пожар. Чудотворную икону собирались вынести: несколько самых сильных и смелых мужей были отправлены снять ее и унести в безопасное место за пределы Кремля. Но никакими силами не смогли сдвинуть святыню с места. По свидетельству очевидцев, в этот момент в небе над Успенским собором появилось видение " светозарной Жены, осенявшей храм "... Вскоре пожар утих. Среди пепелища стоял нетронутый огнем Успенский собор. С тех пор святая Владимирская икона Божией Матери всегда находилась в кремлевском Успенском соборе.

В последний раз икона покидала Москву в 1812 году - на несколько месяцев ее перенесли во Владимир и Муром, но вскоре она снова вернулась в Успенский собор. Знаменательно, что победа при Бородине была одержана именно 26 августа, в день празднования иконы Богоматери Владимирской. С тех пор икона уже не покидала стен Успенского собора.

Она находилась в алтаре храма, выносили ее только в честь значительных событий, таких, как коронация императора. В иконостасе храма ее место занимал список "в меру и подобие", который и сейчас можно увидеть в Успенском соборе.

В 1928 году икону поместили в Третьяковскую галерею, к счастью, она не была утрачена, как многие православные святыни в годы гонений на Церковь.

15 декабря 1999 года Владимирская икона Божьей Матери была окончательно передана Государственной Третьяковской галереей в находящийся при ней храм святителя Николая в Толмачах, с тех пор она постоянно находится в экспозиции храма-музея. Там она хранится и поныне в специально изготовленном киоте, защищающем святыню от внешних воздействий, под пуленепробиваемым стеклом, а специальные приборы поддерживают в помещении храма особый режим температуры и влажности, способствующий защите находящихся в нем святынь.